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大鼠肺成纤维细胞的原代培养实验
上传时间:2019-08-12 16:39
一,实验材料的制备1?
?Wister奶牛在动物生命的第一天到第四天?
2?
试剂?
PBS,培养基(含有Hyclone的低葡萄糖Hyclone DMEM,10%新生牛血清,100U / ml Esterosterine,1%明胶PBS,0)。
25%胰蛋白酶(包括EDTA,GIBCO),碘酒拭子,酒精?
3?
直接切割2,2弯曲,剪切和眼科眼科设备,2个眼科钳,2个直弯曲眼科钳,3套玻璃板,25 cm 2塑料瓶(Costar)。
二,具体操作?
1?
准备一个涂有果冻的烧瓶(2-3个过夜),取出明胶,用2毫升培养液冲洗烧瓶并放在干净的工作台上?
2?
解剖肺:取出酒精浸泡的新生大鼠,转移到干净的台式玻璃盘中,并在酒精球棉脱碘之前用碘消毒胸部皮肤。
翻转哺乳期小鼠颈部皮肤的左侧,彻底暴露乳房,切开右手皮肤,直接切开眼睛,将其完全撕开,然后用酒精溶解,然后用其他眼科剪刀弯曲。沿着胸骨的左下缘向上切割肋骨,然后切开切口中心的胸骨。
由眼科医生切除肺并置于含有PBS(含有200U / ml青霉素)的玻璃板上。
3?
用一些肺叶中的眼用剪刀,用镊子取出血栓周围的纤维组织,用剪刀切开眼睛的支气管和血管壁,然后用含有1×双抗体的PBS冲洗。
4?
通过眼屈曲将肺组织切成1mm 3的大小,并加入含有双抗体的PBS以打开肺组织块。休息15分钟后,我更换了新的PBS。
5?
使用微量移液管,将200μl样品切成醇样品中的尖端,优选200μl(优选用酒精棉球手柄彻底擦拭的超净鉴定站),急剧切割并将火焰弯曲并烘烤。。
用癌症尖端接种一块组织,并以每瓶大约20-25个间隔接种培养瓶,每个小块接0个。
大约5厘米
放置组织块,轻轻倒置烧瓶,从底部到顶部加入约2ml小瓶,在密闭瓶中加入培养基,将烧瓶放入倾斜的培养箱中并使其粘附2至4小时。然后将培养瓶缓慢翻转并平放,使培养物沉降。
手术过程中的上述手术应该是光滑的,因此液体会一点一点地覆盖小块的组织,从而迅速抑制液体的冲击,并扰乱组织块。P qi酱主要作物的失败
48小时后,更换溶液并更换2-3毫升。
6?
在粘合糊剂72小时后,可从组织中除去大量从组织中升起的生长的成纤维细胞,使其生长2-3天,并使覆盖的细胞通过。
注意:由于血清水平较低,内皮细胞可能会少量上升,但很快会死亡吗?
2
7个步骤0
消化25%胰蛋白酶并以1:2常规传代。通过后,通过差异粘附来纯化混合物,即将细胞附着到壁1上。
0到1
5小时后(即,大多数成纤维细胞附着在壁上),丢弃未结合的细胞和培养基,并用新鲜培养基替换。
成纤维细胞是长纺锤形的并且通常以螺旋形生长。
看下面的图片。